磁珠和卵白/抗体符号时期是一项首要的生物时期技能。磁珠是含磁性微粒的球体体育游戏app平台，其名义的官能团可与卵白或抗体通过化学或物理规范连接，兑现符号。在应用方面，平素用于生物医学照应中的卵白质纯化、细胞分选、免疫千里淀，以及临床会诊的免疫检测等规模。该时期具有显耀上风，它能兑现高效分离，独揽磁场可快速从复杂夹杂物等分离出沟通物，大致时刻；特异性高，精确拿获沟通分子，减少干与；且操作方便，对推行建树和东说念主员时期要求相对较低，为科研与临床会诊提供了有劲接济。

符号规范

羧基磁珠符号卵白为例

1. 推行材料

羧基磁珠：罗致粒径为1μm的羧基磁珠（浓度为10mg/mL），准备100μL。

待符号卵白：沟通卵白纯度大于90%，浓度为2mg/mL，把柄磁珠与卵白的聚会比例（1:2-1:5），准备 300μL。

缓冲液及试剂：

活化缓冲液：0.1M MES 缓冲液（pH 6.0），准备500μL。

偶联缓冲液：PBS 缓冲液（pH 7.4），准备2mL。

闭塞缓冲液：1% BSA的PBS缓冲液，准备1mL。

洗涤缓冲液：含0.05% Tween-20的PBS缓冲液，准备5mL。

活化试剂：EDC和 NHS，EDC 浓度为 50μg/mL，NHS浓度为25μg/mL，把柄磁珠体积沟通用量（100μL磁珠分歧对应5μgEDC和2.5μgNHS）。

2. 推行规范

2.1 磁珠活化

将100μL的羧基磁珠悬液轰动至离心管中，置于磁力架上，待磁珠十足吸附到管壁后，注重吸去上清液。

加入500μL的 0.1M MES缓冲液（pH 6.0），涡旋混匀使磁珠重悬。

分歧加入5μgEDC 和2.5μgNHS，轻轻涡旋混匀后，室温孵育30分钟，时期每隔5-10分钟轻轻倒置混匀一次，使磁珠充分活化。

2.2 卵白符号

活化截至后，将离心管置于磁力架上，吸去上清液。

加入500μL的PBS 缓冲液（pH 7.4），洗涤磁珠3次，每次洗涤时涡旋混匀，磁吸后吸去上清液，以去除未反映的活化试剂。

加入300μL浓度为2mg/mL的待符号卵白溶液，用PBS缓冲液补都至500μL，轻轻涡旋混匀，使卵白与磁珠充分斗殴，然后在4℃下飘浮孵育2小时，确保符号反映充分进行。

2.3 闭塞未反映位点

符号反映完成后，将离心管置于磁力架上，齐集磁珠，吸去上清液。

加入1mL的1% BSA的PBS 缓冲液，涡旋混匀，室温孵育1小时，闭塞磁珠名义未反映的羧基位点，减少非特异性吸附。

2.4 洗涤去除未聚会的卵白

闭塞截至后，将离心管置于磁力架上，弃去上清液。

加入1mL的含0.05% Tween-20的PBS 缓冲液，涡旋混匀，使磁珠充分悬浮，然后磁吸分离，吸去上清液。叠加洗涤规范5次，确保透彻去除未聚会的卵白和其他杂质。

2.5 保存符号后的磁珠

将符号好的磁珠用500μL含0.1% BSA和0.02% NaN3的PBS缓冲液重悬，使其浓度为2mg/mL（磁珠浓度），并存放在4℃雪柜中备用，幸免反复冻融。

磁珠符号卵白/抗体时，影响聚会恶果的要素有哪些？

1. 磁珠要素：磁珠的粒径大小与比名义积相干，粒径小比名义积大，表面上聚会位点更多，但过小可能不易操作和分离。其名义官能团的种类和数目至关首要，举例羧基、氨基、环氧基等，官能团数目多、活性高，与卵白或抗体的反映契机就大。磁珠的散播性也进攻惨酷，散播均匀能让卵白或抗体充分斗殴，若发生团员则会减少灵验聚会位点。

2. 卵白/抗体要素：纯度高、浓度合适的卵白或抗体更易聚会，浓渡过高可能产生空间位阻或非特异性吸附，过低则碰撞聚会几率小。卵白或抗体的结构齐全性影响活性基团的线路进度，结构舒展、活性基团线路多，与磁珠的反映就更告成。

3. 反映条目要素：包括缓冲液的种类、pH 值、离子强度等。妥当的 pH 值能保证磁珠和卵白/抗体的电荷景象利于聚会，离子强渡过高可能屏蔽电荷缩小聚会力。反映温度和时刻也有影响，温度妥当可加速反映速度，但过高易导致卵白或抗体变性，时刻过短反映不充分，过长可能增多杂质吸附。

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